腺病毒相關病毒(adenovirus associated virus，AAV)是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒。其基因組DNA小于5kb，無包膜，外形為裸露的20面體顆粒。AAV不能獨立復制，只有在輔助病毒（如腺病毒、單純皰疹病毒、痘苗病毒）存在時，才能進行復制和溶細胞性感染，否則只能建立溶源性潛伏感染。

　　AAV基因組包含3個啟動子P5、P19、P40，基因組中間含有兩個開放閱讀框（ORF），從左往右依次為Rep基因和Cap基因。啟動子P5和P19負責Rep基因的轉錄，參與Rep78，Rep68，Rep52，Rep40這4個非結構蛋白的合成，這四種蛋白主要負責病毒基因組的復制、轉錄調控、位點特異性整合等。Cap基因編碼3個衣殼蛋白不同剪切體VP1、VP2和VP3，構成AAV的衣殼（VP1、VP2、VP3的比例約為1:1:10），由啟動子P40負責轉錄。

　　重組腺相關病毒載體（AAV）所包含的DNA一般是用外源基因表達元件替換AAV的編碼基因，僅保留了病毒復制和包裝所需的ITR序列。通過反式補償Rep基因、Cap基因和輔助病毒功能因子包裝產生的攜帶外源DNA。AAV具有安全性高、免疫原性低、宿主范圍廣、能介導基因在動物體內長期穩定表達等特點，是一種重要的攜帶外源基因病毒工具，被廣泛用于生命科學研究，是重要的基因治療載體之一。

　　研究發現AAV具有多種血清型，各種不同血清型的AAV載體的主要區別是衣殼蛋白不同，因此對不同的組織和細胞的轉染效率存在差異。AAV病毒包裝所用載體沒有任何共同區域，避免通過重組而恢復出野生型病毒，宿主細胞免疫反應被降至低，從而允許對具有免疫能力的宿主細胞進行基因傳遞，重組AAV在理論上也不具有復制的能力。

　　建議客戶針對不同組織器官選擇相應血清型的AAV病毒。

　　腺相關病毒基因傳遞的優勢

　　1.宿主范圍廣：AAV可高效感染分化和非分化細胞；

　　2.多種血清型：AAV1，AAV2，AAV5，AAV6，AAV7，AAV8，AAV9和AAV2/BBB等；

　　3.安全性高：ITR序列和rep/cap基因分別由獨立的質粒表達；未發現AAV對人體致病，rAAV去除了wtAAV基因組的96%，從而進一步保證了其安全性；

　　4.免疫原性低：AAV2的基因組僅4681個核苷酸，便于用常規的重組DNA技術進行操作，而且進行動物實驗時造成的免疫反應??；

　　5.載體多樣性：不同的啟動子（神經特異性啟動子Human Synapsin、CamkIIα和GFAP等）和多種報告基因（EGFP、mCherry、RFP和luciferase等）可供客戶選擇；

　　6.滴度高：可提供1012V.G/ml及以上滴度的病毒.，高可達1014V.G/ml；

　　榮森基因AAV服務：

　?。╝）根據客戶需要提供AAV載體相關基因編輯，包括基因重組、sgRNA以及shRNA/miRNA設計和構建（包括多重靶向編輯）等。

　?。╞）AAV包裝純化以及滴度和純度檢測，包括以下：

　　基因過表達AAV；

　　靶向敲除基因的sgRNA及CRISPR/Cas9相關AAV；

　　干擾基因表達的shRNA/miRNA相關AAV；

　　病毒生產流程：

　　應用實例

(A)

(B)

　　圖（A）為AAV2/9-CAG-GFP病毒在骨骼肌表達，取樣時間為注射后一個月。

　　圖（B）為AAV2/8-TBG-GFP病毒在肝臟表達，取樣時間為注射后一個月。

AAV在肝臟中的應用

　　本公司AAV病毒包裝采用3質粒系統：穿梭重組質粒pAAV-shuttler，輔助質粒AdHelperVector（pAdDeltaF6）和包裝質粒pAAV-rep/capVector。