重組腺病毒(AdV)是一種復制缺陷的腺病毒載體系統,在基因治療、基礎生命科學研究等領域被廣泛應用。目前常用的腺病毒載體基于人腺病毒5型(Ad5),其基因組是36kb長的線性雙鏈DNA。腺病毒可通過自身的纖維(fiber)和細胞表面的受體結合被內吞進入細胞,然后從內吞體(endosome)轉移到細胞質和細胞核內,借助細胞的轉錄和翻譯機器啟動病毒的復制組裝。一個完整的病毒生活周期會引發細胞死亡從而釋放出病毒粒子。在腺病毒生產和使用過程中,除293細胞能提供反式E1蛋白外,其它細胞都不能進行腺病毒擴增,因此大大提高了生物安全性,獲得的重組病毒非常穩定。
本公司的腺病毒包裝采用單質粒的AdEasy包裝系統。目的基因克隆至腺病毒穿梭質粒(pAdtrack-CMV),將穿梭質粒線性化后與腺病毒骨架質粒利用同源重組獲得重組腺病毒質粒,轉染293A細胞包裝病毒。
本公司提供以下服務:
1.可以將外源目的DNA序列或目的shRNA/miRNA克隆至腺病毒的穿梭載體,進一步包裝成腺病毒,用于過表達外源基因或者干擾相關基因的表達。
2.可設計具有sgRNA及CRISPR/Cas9的腺病毒質粒,包裝病毒,用于靶向敲除基因。
應用實例
腺病毒感染細胞應用(a)圖:PAdeasy-GFP在293細胞的表達。(b)圖:帶GFP的腺病毒感染原代肝細胞48-72h的熒光圖像。
腺病毒介導的shRNA干擾作用在小鼠肌肉中的應用:
在小鼠的兩條腿的脛骨前肌分別注射對照腺病毒和裝載Baf60c(smarcd3)干擾片段的腺病毒,每天兩次,連續兩天,5天后取肌肉組織,QPCR檢測Baf60c的表達情況,Western blot檢測信號通路蛋白的表達情況,以及組織染色。